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革蘭氏染色主要用來區(qū)分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。先來介紹一下這個實驗原理：

因為革蘭氏陽性菌的細胞壁較厚，肽聚糖網(wǎng)層較厚且交聯(lián)致密，沒有類脂存在，而革蘭氏陰性菌的細胞壁薄，肽聚糖網(wǎng)層薄且交聯(lián)較差，外膜上存在較多的類脂。兩者的這些區(qū)別造成了在進行革蘭氏染色后出現(xiàn)不同染色結(jié)果。

革蘭氏陽性菌：當結(jié)晶紫染液和碘液相遇后，形成不溶性的有色復(fù)合物，當用乙醇脫色時，因為胞體的失水，而使得肽聚糖交聯(lián)更加緊密，網(wǎng)孔縮小，把紫色復(fù)合物截留在細胞內(nèi)，從而使細胞呈現(xiàn)紫色；而革蘭氏陰性菌與乙醇脫色時，以類脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能截留形成的紫色復(fù)合物，所以呈現(xiàn)無色，再經(jīng)沙黃復(fù)染后呈現(xiàn)紅色。

革蘭氏染色方法：

1、涂片：利用移液槍吸取10ul的菌液滴在載玻片，用燒紅的涂菌棒涂抹均勻，面積適中。

2、干燥與固定：將載玻片放置在酒精燈火焰上方一定距離處，涂菌面向上，將菌液烤干，溫度不宜過高，炙烤不宜時間太長，固定就是將涂菌面向上，載玻片快速在火焰中過2-3次。

3、初染：在菌液面上滴加1-2滴草酸銨結(jié)晶紫，染色1min

4、水洗：在小股水流下沖洗，直至無色為止。

5、媒染：吸取300ul碘液滴在樣本上，染色1min。

6、水洗：在小股水流下沖洗，直至無色為止。

7、脫色：傾斜玻片，滴加95%的乙醇，約30s，再水洗一次。

8、復(fù)染：在樣本上滴加沙黃染液1-2滴，染色1min。

9、水洗：在小股水流下沖洗，直至流過玻片的水無色為止。

10、干燥與觀察：用紙擦去水，干燥后在顯微鏡下觀察，菌體呈現(xiàn)紫色的是革蘭氏陽性菌，呈現(xiàn)紅色的是革蘭氏陰性菌。